Titik hitam (Colletotrichum coccodes) telah menjadi penyakit umbi kentang yang signifikan secara ekonomi karena kemampuannya menyebabkan kematian dini dedaunan. Penyakit bernama titik hitam ini berkaitan dengan banyaknya mikrosklerotia hitam yang dihasilkan jamur pada inangnya. Pada bulan Agustus-September 2022, gejala titik hitam diamati pada c. 48% batang kentang (tepat di atas permukaan tanah) , c. 27% stolon dan c. 22% dari permukaan kulit umbi yang dipanen di lahan terbuka [Goodlands (20°04'13.1"S 57°39'37.0"E), Réduit (20°14'00.5"S 57°29'28.5"E) dan Plaine Sophie (20°22'23.0“S 57°29'08.4”E)] di Mauritius.
Lima belas jaringan kentang yang sakit masing-masing dipotong menjadi delapan bagian kecil menggunakan penggerek gabus yang disterilkan dengan api, yang kemudian didesinfeksi permukaannya dengan pemutih 10% selama dua menit, diikuti dengan pembilasan dengan air suling steril tiga kali, dan akhirnya dilapisi dengan kloramfenikol yang telah diubah. piring agar dekstrosa kentang (PDA). Pelat yang diinokulasi diinkubasi pada suhu 25°C selama 10 hari dalam kegelapan. Koloni putih dengan miselia datar dan hialin diamati pada semua lempeng yang diinokulasi yang kemudian mengembangkan banyak sklerotia gelap dan bulat pada koloni dalam 10 hari. Kultur murni diperoleh dengan mentransfer ujung hifa ke PDA, diinkubasi selama 10 hari pada suhu 25°C dalam gelap, dan diperiksa karakteristik morfologinya. Setelah pewarnaan dengan pewarna kapas laktofenol menggunakan teknik slide bersih, konidia uniseluler yang banyak, kecil, sedikit menyempit dan diamati dengan panjang dan lebar rata-rata (n = 50) masing-masing sebesar 11.0 dan 3.6 μm.
Patogenisitas salah satu dari tiga isolat (P200) dikonfirmasi pada enam batang dan umbi kentang berumur 90 hari. Umbi kentang yang sehat awalnya disterilkan permukaannya dengan cara direndam dalam natrium hipoklorit 2% selama dua menit, dibilas dua kali dalam air suling steril dan dibiarkan kering dalam kertas tisu yang disterilkan sebelum disebarkan satu per satu ke dalam kantong pot plastik (2 liter). Setelah 45 hari, tanaman kentang disiram dengan 50 mL suspensi konidia (106 konidia/ml) isolat P200 di sebelah daerah kerah. Tanaman kentang yang tidak diinokulasi dijadikan sebagai kontrol dan disiram dengan air suling steril. Setelah 90 hari, pemeriksaan visual menunjukkan gejala titik hitam di bagian bawah batang, dekat permukaan tanah. Umbi yang dipanen mempunyai bercak abu-abu dengan sklerotia kecil di permukaan kulit. Tanaman kentang kontrol tidak menunjukkan gejala apa pun pada batang maupun umbi yang dipanen. Isolat asli diperoleh dari umbi yang diinokulasi, sehingga memenuhi postulat Koch. Percobaan diulang tiga kali dengan hasil yang sama.
DNA diekstraksi dari kultur tiga isolat berumur 10 hari menggunakan protokol CTAB. Amplifikasi dan sekuensing PCR dilakukan dengan pasangan primer ITS5/ITS4 dan GDF/GDR untuk masing-masing daerah transkripsi internal (ITS) dan gliseraldehida 3-fosfat dehidrogenase. Penelusuran BLASTn dilakukan dengan urutan masing-masing isolat, P86 (ITS: GenBank Accession No. OR145915; GADPH: OR232172), P136 (ITS: OR145916; GADPH: OR232173) dan P200 (ITS: OR145917; GADPH: OR232174). Semua rangkaian memiliki identitas 99% hingga 100% dengan lebih dari 100 Colletotrichum coccodes misalnya 100% identitas dengan isolat BBA 70879 (MT221566.1) untuk ITS, dan 99.66% identitas dengan isolat CBS 112987 (JX546735) untuk GADPH.
Sejauh pengetahuan kami, ini adalah laporan pertama mengenai titik hitam pada kentang yang disebabkan oleh C.cocodes di Mauritius. Temuan penelitian ini akan membantu meningkatkan kesadaran agen ini dan membantu petugas penyuluhan pertanian selama surveilans penyakit di lahan kentang.
Referensi: Takoree, SD, Neetoo, H. & Ranghoo-Sanmukhiya, VM (2023) Laporan pertama Colletotrichum coccodes menyebabkan titik hitam pada kentang di Mauritius. Laporan Penyakit Baru, 48, e12224. https://doi.org/10.1002/ndr2.12224
